Elektroforéza sérových proteinů (ELFO)
Parametry metody
Elektroforéza na agarózovém gelu
Sérum: 7 dní při 2-8 °C, 1 měsíc při -20 °C
| Sérum - frakce | ||||||||
| Albumin | 54 - 66 % | 35,1 - 56,1 g/L | ||||||
| Alfa-1-globulin | 1,4 - 2,8 % | 0,9 - 2,4 g/L | ||||||
| Alfa-2-globulin | 9,1 - 13,8 % | 5,9 - 11,7 g/L | ||||||
| Beta-globulin | 8,7 - 14,4 % | 5,7 - 12,2 g/L | ||||||
| Gama-globulin | 10,6 - 19,2 % | 6,9 - 16,3 g/L | ||||||
Elektroforéza slouží jako screeningová metoda, která nám pomáhá odhalit abnormality bílkovin v séru a dalších biologických tekutin (moč, likvor). ELFO bílkovin séra bílkoviny rozdělí na albuminy a skupinu globulinů. Globuliny se dále dělí na 4-5 frakcí: alfa1, alfa2, beta (beta1 a beta2) a gama.
1) Zóna albumin
Změny koncentrace v rozmezí 35 -45 g/l denzitu zóny neovlivní, oslabení zóny je viditelné při poklesu koncentrace < 30 g/l.
↑ dehydratace
↓ poškození jater, chronická infekce, onemocnění ledvin, podvýživa, monoklonální gamapatie
2) Zóna alfa-1-globuliny
Tvoří ji především alfa-1-antitrypsin, který zásadně ovlivňuje denzitu této zóny.
↑ akutní zánětlivé reakce
↓ těžké hepatopatie, hypoproteinemie, vrozený defekt tvorby alfa-1-antitrypsinu
3) Zóna alfa-2-globuliny
Denzitu ovlivňují alfa 2 makroglobulin a haptoglobin. Koncentrace alfa-2-makroglobulinu se mění s věkem (v pubertě 2-3x roste, po 20. roku života klesá k hodnotám v dětství).
↑ nefrotický syndrom, akutní a chronické záněty
↓ reumatoidní artritida, myelom, akutní pnakreatitida, onemocnění jater, hemolytická anémie
4) Zóna beta-1-globuliny
Hlavní bílkovinou je transferin. Hemopexin se nebarví anionickými barvivy a jeho koncentrace beta-1-globuliny neovlivňuje.
↑ anemie způsobené nedostatkem železa
↓ onemocnění jater, podvýživa, zánětlivá onemocnění
5) Zóna beta-2-globuliny
Tvoří ji C3 složka komplementu.
↑ akutní zátěž organismu
↓ autoimunitní onemocnění (tvora imunokomplexů)
6) Zóna gamaglobuliny
Jsou imunoglobuliny syntetizované plazmatickými buňkami. Kvantitativně je nejvýznamnější IgG. Monoklonální imunoglobuliny se mohou nacházet v různých vzdálenostech od startu: mezi alfa-2 a gama frakcí. Jedná se o patologické proteiny (paraproteiny), které jsou syntetizovány B-buněčným lymfocytárním klonem při nádorových onemocněních (např. mnohočetný myelom, leukémie).
↑ polyklonální (nebo monoklonální) gamaglobulinemie, jaterní onemocnění, chronické infekce
↓ fyziologicky u malých dětí, hypoimunitní syndrom
IMUNOFIXACE BÍLKOVIN SÉRA
Provádí při podezření na přítomnost monoklonální komponenty (monoklonální protein, M-protein, paraprotein) při elektroforetickém vyšetření proteinů krevního séra. Imunofixace je průkaz třídy a typu monoklonální komponenty na principu reakce antigenu se specifickou protilátkou, rutinně provádí s antiséry IgG, IgA, IgM, kappa, lambda. Po elektroforetickém rozdělení bílkovin séra se postupně přidají specifické protilátky proti těžkým řetězcům imunoglobulinů IgG, IgA a IgM (příp.IgD) a proti lehkým řetězcům kappa a lambda. Reakcí antigenu se specifickou protilátkou vznikají precipitáty, které se hodnotí vizuálně. Imunofixace séra umožňuje detekovat monoklonální gradienty o koncentraci <0,25-1g/l.